Biziň töweregimizde adaty ýaly görünýän, ýöne aslynda olar bize sessiz-üýnsüz goşant goşýan köp sanly meşhur däl gahrymanlar bar. Proteinaza K molekulýar diagnostika pudagynda "öwrülmedik gahryman", emma pudakdaky "uly we güýçli" proteinaza K şeýle pes derejeli, biz onuň ähmiýetini köp wagtlap gözden gaçyrdyk. Täze täç epidemiýasynyň başlamagy bilen proteinaza K-a bolan isleg ýokarlandy we ýurduň içinde we daşynda üpjünçilik sarp edilişinden has yzda galdy we hemmeler birden proteinaza K-nyň şeýle möhümdigine düşündiler.
Proteinaza K näme üçin ulanylýar?
Proteinaza K proteolitik ferment işjeňligine eýe bolan serin proteaza bolup, dürli gurşawlarda (pH (4-12.5), ýokary duz buferi, 70°C ýokary temperatura we ş.m.) işjeňligini saklap bilýär. Mundan başga-da, proteinaza K-nyň işjeňligi SDS, moçewina, EDTA, guanidin gidrohlorid, guanidin izotiosiýanat we ş.m. tarapyndan basylyp saklanmaýar we belli bir mukdarda ýuwujy serişde hem proteinaza K-nyň işjeňligini ýokarlandyryp bilýär. Lukmançylyk bejergisinde (wirus we mikrob dezinfeksiýasy), iýmitde (et ýumşadyşynda), deride (tüýleri ýumşatmakda), çakyr ýasamakda (spirt arassalaýjysynda), aminokislota taýýarlamakda (ýüňleriň zaýalanmagynda), nuklein kislotasynyň ekstraksiýasynda, ýerinde gibridleşdirmede we ş.m. proteinaza K ulanylyşlary bar. Iň köp ulanylýan ulanylyş nuklein kislotasynyň ekstraksiýasydyr.
Proteinaza K nusgadaky ähli görnüşli beloklary, şol sanda nuklein kislotalaryna berk baglanyşykly gistonlary fermentleşdirip bilýär, şonuň üçin nuklein kislotalary nusgadan boşadylyp, ekstrakta goýberilip, ekstraksiýanyň we arassalamagyň indiki ädimini ýeňilleşdirip bilýär. Wirus nuklein kislotasyny anyklamakda proteinaza K wirus nusga alma ergininiň möhüm bölekleriniň biridir. Proteinaza K wirusyň örtük proteinini ýaryp we işjeňsizleşdirip bilýär, bu bolsa daşamak we anyklamak tapgyrynda has howpsuzdyr; mundan başga-da, proteinaza K RNazany hem dargadyp bilýär, wirus RNK-nyň dargamagynyň öňüni alýar we nuklein kislotasyny anyklamaklygy ýeňilleşdirýär.
Proteinaz K-nyň bir gijede şöhraty
Ylmy barlaglar ulgamynda ýa-da IVD ulgamynda bolsun, nuklein kislotasyny çykarmak iň esasy tejribedir, şonuň üçin proteinaza K hemişe örän möhüm bir zat bolupdyr. Şeýle-de bolsa, geçmişde proteinaza K onuň rolundan has az belli bolupdyr. Munuň uly bölegi proteinaza K-nyň teklip we isleg gatnaşygynyň örän durnukly bolmagy bilen baglanyşyklydyr. Proteinaza K-nyň üpjünçiliginiň kynçylyk döretjekdigini az adam pikir eder.
Täze täç epidemiýasynyň başlanmagy bilen, nuklein kislotasyny barlamak üçin isleg artdy. 2020-nji ýylyň iýun aýynyň ahyryna çenli Hytaý 90 milliona golaý täze täç synagyny tamamlady we bu san dünýä derejesinde has-da howsala salýar. Nuklein kislotasyny çykarmak boýunça tejribelerde proteinaza K-nyň iş konsentrasiýasy takmynan 50-200 mkg/ml-dir. Umuman, nuklein kislotasynyň nusgasyny almak üçin takmynan 100 mkg proteinaza K gerek bolýar. Hakyky ulanylyşda, nuklein kislotasyny çykarmagyň netijeliligini ýokarlandyrmak üçin, köplenç Proteinaza K has köp mukdarda ulanylýar. Täze koronawirusyň nuklein kislotasyny anyklamak köp mukdarda proteinaza K islegini döretdi. Proteinaza K-nyň başlangyç teklibi we isleg deňagramlylygy çalt bozuldy we proteinaza K bir gijede epidemiýanyň öňüni almak üçin möhüm materiala öwrüldi.
Proteinaza K öndürilişindäki kynçylyklar
Epidemiýanyň ösmegi bilen proteinaza K-nyň möhüm gymmaty adamlar tarapyndan gymmatlandyrylsa-da, proteinaza K-nyň aşa pes derejeliligi sebäpli proteinaza K-nyň önümçiligine ýerli kompaniýalaryň azdygy utançlydyr. Adamlar proteinaza K önümçiligini ýola goýmak isleýänlerinde Önümçilik prosesinde proteinaza K-nyň örän aýratyn bir proteindigi anyklandy. Proteinaza K-nyň önümçilik kuwwatyny gysga wagtyň içinde giňeltmek örän kyn.
Proteinaza K-nyň uly möçberde öndürilmegi aşakdaky kynçylyklar bilen ýüzbe-ýüz bolýar
1. Pes ekspresiýa
Proteinaza K beloklaryň köpüsini spesifik däl ýagdaýda dargadyp, ekspresiýa eýesi öýjük üçin çynlakaý zäherlilik döredip biler. Şonuň üçin proteinaza K-nyň ekspresiýa derejesi, adatça, örän pesdir. Proteinaza K-ny ýokary derejede ekspresiýa edýän ekspresiýa ulgamlaryny we ştammlaryny skrining etmek, adatça, has uzak sikli talap edýär.
2. Pigmentleriň we nuklein kislotalarynyň galyndylary
Giň möçberli fermentasiýa köp mukdarda pigment we eýe nuklein kislotasynyň galyndylaryny getirýär. Bu hapaçylyklary ýönekeý arassalamak prosesi bilen aýyrmak kyn, çylşyrymly arassalamak bolsa çykdajylary ýokarlandyrýar we dikeldilme tizligini peseldýär.
3. Durnuksyzlyk
Proteinaza K ýeterlik derejede durnukly däl, ol öz-özüni fermentleşdirip bilýär we ony gorag serişdesi bolmazdan 37°C-de uzak wagtlap durnukly saklamak kyn.
4. Çökmegi aňsat
Proteinaza K-nyň doňdurylyp guradylan poroşogyny taýýarlanda, doňdurylyp guradylan poroşogyň düzüminde proteinaza K-nyň gaty mukdarynyň köp bolmagyny üpjün etmek üçin ýokary konsentrasiýada doňdurylyp guradylan gorag serişdesini goşmak zerurdyr, ýöne proteinaza K-nyň konsentrasiýasy 20 mg/ml we ondan ýokary derejä ýetende, bu aňsatlyk bilen ýüze çykýar. Agregasiýa çökündi emele getirýär, bu bolsa gaty mukdary ýokary bolan proteinaza K-nyň doňdurylyp guradylmagyna uly kynçylyklary döredýär.
5. Uly maýa goýum
Proteinaza K güýçli proteaza işjeňligine eýedir we laboratoriýada beýleki proteazalary gidrolizläp bilýär. Şonuň üçin proteinaza K ylmy-barlag we işläp taýýarlamak hem-de önümçilik üçin ýöriteleşdirilen önümçilik meýdançalaryny, enjamlary we işgärleri talap edýär.
XD BIOCHEM-iň proteinaza K ergini
“XD BIOCHEM” kompaniýasy kämil belok ekspresiýasy we arassalaýyş platformasyna eýedir we rekombinant beloklaryň ekspresiýasy we arassalaýyşynda hem-de önümçilik proseslerini optimizirlemekde baý tejribe toplady. Ylmy-barlag we işläp düzmek toparynyň çalt döredilmegi arkaly proteinaza K-nyň uly möçberli önümçilik prosesi ýeňlip geçildi. Doňdurylyp guradylan poroşogyň aýlyk önümçiligi 30 kg-dan gowrak. Önüm durnukly öndürijilige, ýokary fermentlere mahsus işjeňlige we eýe sitohrom we nuklein kislotasynyň galyndylaryna eýe däl. “XD BIOCHEM” kompaniýasy bilen habarlaşmaga hoş geldiňiz. Synag bukjasyny alyň (E-poçta:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM-iň tehniki çözgütleri şulary öz içine alýar
Köp nusgaly plazmid integrasiýasyny ulanmak bilen, ekspresiýa derejesi 8g/L bolan ýokary ekspresiýaly ştammlar saýlanýar, bu bolsa proteinaza K-nyň pes ekspresiýa derejesi meselesini çözýär.
Köp basgançakly arassalaýyş prosesini döretmek arkaly, proteinaza K-nyň sitohrom we nuklein kislotasynyň galyndylary standart gymmatdan aşakda üstünlikli aýryldy.
Gorag bufer formulalarynyň ýokary öndürijilikli skriningi arkaly proteinaza K-ny 37°C-de durnukly saklap bilýän bufer saýlanyldy.
Skrining buferleri proteinaza K-nyň ýokary konsentrasiýalarda agregasiýasynyň we çökmeginiň aňsatlygy meselesini çözýär we proteinaza K-nyň ýokary gaty maddaly doňduryjy-guradyjy usulynyň esasyny goýýar.
XD BIOCHEM proteinaz K nusgasy
XD BIOCHEM proteinaza K durnuklylyk synagy: otag temperaturasynda 80 günden soň işjeňlikde düýpli üýtgeşiklik bolmaz
XD BIOCHEM proteinaza K durnuklylyk synagy: otag temperaturasynda 80 günden soň işjeňlikde düýpli üýtgeşiklik bolmaz.
XD BIOCHEM proteinaza K-nyň we bäsdeş önümleriň nuklein kislotasynyň ekstraksiýa täsiriniň deňeşdirilmegi. Nuklein kislotasynyň ekstraksiýa prosesinde degişlilikde XD BIOCHEM we bäsdeş proteinaza K ulanylýar. XD BIOCHEM proteinaza K-nyň ekstraksiýa netijeliligi ýokary we nyşana geniniň Ct gymmaty pes.
Ýerleşdirilen wagty: 2021-nji ýylyň 31-nji dekabry