Ditiotreitol (DTT) köp ulanylýan reduksasiýa serişdesi bolup, täze ýaşyl goşundy hökmünde hem bellidir. Ol iki merkaptan topary (-SH) bolan kiçi molekulýar organiki birleşmedir. Reduksasiýa häsiýetleri we durnuklylygy sebäpli DTT biohimiýa we molekulýar biologiýa tejribelerinde giňden ulanylýar.
DTT-niň esasy wezipesi beloklarda we beýleki biomolekulalarda disulfid baglanyşyklaryny azaltmakdyr. Disulfid baglanyşygy belogyň gatlanmagynyň we durnuklylygynyň möhüm bölegidir, ýöne käbir tejribe şertlerinde, mysal üçin, reduksiýa edilýän SDS-PAGE analizinde, belogyň rekombinasiýasynda we gatlanmagynda, belogyň giňişlik gurluşyny açmak üçin disulfid baglanyşygyny iki tiol toparyna çenli azaltmak zerurdyr. DTT disulfid baglanyşyklary bilen reaksiýa girip, olary merkaptan toparlaryna çenli azaldyp biler, şeýlelik bilen belogyň giňişlik gurluşyny açýar we ony seljermegi we manipulýasiýa etmegi aňsatlaşdyrýar.
DTT fermentiň işjeňligini we durnuklylygyny goramak üçin hem ulanylyp bilner. Käbir ferment katalizlenen reaksiýalarda fermentiň işjeňligi oksidleýji tarapyndan peselip bilner. DTT oksidleýjiler bilen reaksiýa girip, olary zyýansyz maddalara çenli peseldip, şeýlelik bilen fermentiň işjeňligini we durnuklylygyny gorap biler.
β-merkaptoetanol (β-ME) ýaly däp bolan reduksiýa agentleri bilen deňeşdirilende, DTT has howpsuz we has durnukly reduksiýa agenti hasaplanýar. Ol diňe bir suw ergininde durnukly bolman, eýsem ýokary temperatura we kislota-esas şertlerinde reduksiýa häsiýetlerini hem saklaýar.
DTT-niň ulanylyşy deňeşdirme boýunça ýönekeý. Umuman alanyňda, DTT degişli buferde eredilýär we soňra tejribe ulgamyna goşulýar. DTT-niň optimal konsentrasiýasy anyk tejribe görä kesgitlenmeli we adatça 0,1-1 mM aralygynda ulanylýar. Pes konsentrasiýalar öýjükleriň ösüşine ýaramaz täsirleri azaldyp biler we maksatly beloklaryň aşa köp ekspresiýasy sebäpli sitotoksikligi azaldyp biler. Ýokary konsentrasiýalar öýjükleriň metabolik agramynyň artmagyna sebäp bolup, öýjükleriň ösüşine we ekspresiýanyň netijeliligine täsir edip biler.
Optimal konsentrasiýany kesgitlemegiň usuly, dürli konsentrasiýalarda IPTG induksiýa synaglaryny geçirmek arkaly maksatly belogyň ekspresiýa derejesini bahalandyrmak bolup biler. Kiçi göwrümli medeniýet synaglary dürli IPTG konsentrasiýalaryny (meselem, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM we ş.m.) ulanyp geçirilip bilner we dürli konsentrasiýalardaky ekspresiýa täsirini maksatly belogyň ekspresiýa derejesini anyklamak arkaly bahalandyrmak bolýar (meselem, Western blot ýa-da fluoresensiýa anyklaýyş). Tejribe netijelerine görä, iň gowy ekspresiýa täsirine eýe bolan konsentrasiýa optimal konsentrasiýa hökmünde saýlanyldy.
Mundan başga-da, meňzeş tejribe şertlerinde giňden ulanylýan IPTG konsentrasiýa diapazonyny düşünmek we soňra tejribe zerurlyklaryna laýyklykda optimizirlemek we sazlamak üçin degişli edebiýata ýa-da beýleki laboratoriýalaryň tejribesine hem salgylanyp bilersiňiz.
Optimal konsentrasiýanyň dürli ekspresiýa ulgamlaryna, nyşana beloklaryna we tejribe şertlerine baglylykda üýtgeýändigini bellemek möhümdir, şonuň üçin her bir ýagdaýa aýratynlykda optimizirlemek iň gowusydyr.
Gysgaça aýdylanda, DTT beloklardaky we beýleki biomolekulalardaky disulfid baglanyşyklaryny azaltmak we fermentleriň işjeňligini we durnuklylygyny goramak üçin ulanylyp bilinýän ýygy-ýygydan ulanylýan reduksiýa agentidir. Ol biohimiýa we molekulýar biologiýa tejribelerinde giňden ulanylýar.
Ýerleşdirilen wagty: 2023-nji ýylyň 28-nji sentýabry