Dithiothreitol (DTT), köplenç ulanylýan azaldýan serişdedir, täze ýaşyl goşundy hökmünde hem bellidir.Iki sany merkaptan topary (-SH) bilen kiçijik molekulýar organiki birleşme.Azaldýan häsiýetleri we durnuklylygy sebäpli DTT biohimiýa we molekulýar biologiýa synaglarynda giňden ulanylýar.
DTT-iň esasy roly beloklarda we beýleki biomolekulalarda disulfid baglanyşyklaryny azaltmakdyr.Disulfid baglanyşygy beloklaryň ýygrylmagynyň we durnuklylygynyň möhüm bölegi bolup durýar, ýöne azaldylýan SDS-PAGE derňewi, beloklaryň rekombinasiýasy we bukulmagy ýaly käbir synag şertlerinde, giňişlik gurluşyny açmak üçin disulfid baglanyşygyny iki tiol toparyna azaltmak zerur. belok.DTT, merkaptan toparlaryna azaltmak üçin disulfid baglanyşyklary bilen reaksiýa berip biler, şeýlelik bilen belogyň giňişlik gurluşyny açar we derňemegi we dolandyrmagy aňsatlaşdyrar.
DTT fermentleriň işjeňligini we durnuklylygyny goramak üçin hem ulanylyp bilner.Käbir ferment-kataliz reaksiýalarynda fermentiň işjeňligi oksidant tarapyndan peselip biler.DTT, zyýansyz maddalara azaltmak üçin oksidantlar bilen reaksiýa berip, fermentiň işjeňligini we durnuklylygyny gorap biler.
Reducing-merkaptoetanol (β-ME) ýaly adaty azaldýan serişdeler bilen deňeşdirilende, DTT has ygtybarly we durnukly azaldyjy serişde hasaplanýar.Diňe suwly erginde durnukly bolman, eýsem ýokary temperaturada we kislota esasly şertlerde peselme häsiýetlerini hem saklaýar.
DTT-ni ulanmak birneme ýönekeý.Umuman, DTT degişli buferde eräp, soňra synag ulgamyna goşulýar.DTT-iň optimal konsentrasiýasy belli bir synag boýunça kesgitlenmeli we adatça 0,1-1mM aralygynda ulanylýar.Pes konsentrasiýalar öýjükleriň ösmegine ýaramaz täsirleri azaldyp biler we maksatly beloklaryň aşa aşa gysylmagy sebäpli sitotoksikligi azaldyp biler.Higherokary konsentrasiýa öýjükleriň köpelmegine we aňlatmagyň netijeliligine täsir edip, öýjükleriň alyş-çalyş ýagdaýyna sebäp bolup biler.
Iň amatly konsentrasiýany kesgitlemegiň usuly, dürli konsentrasiýalarda IPTG induksiýa synaglaryny geçirip, maksatly belogyň aňlatma derejesine baha bermek bolup biler.Kiçi göwrümli medeni synaglar, IPTG konsentrasiýalarynyň bir toparyny (meselem, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM we ş.m.) ulanyp amala aşyrylyp bilner we dürli konsentrasiýalarda aňlatma täsiri maksatly belogyň aňlatma derejesini kesgitlemek arkaly bahalandyrylyp bilner (mysal üçin Günbatar blot ýa-da floresan kesgitlemek).Synag netijelerine görä, iň oňat aňlatma effekti bilen konsentrasiýa iň amatly konsentrasiýa hökmünde saýlandy.
Mundan başga-da, şuňa meňzeş synag şertlerinde giňden ulanylýan IPTG konsentrasiýa diapazonyna düşünmek üçin degişli edebiýata ýa-da beýleki barlaghanalaryň tejribesine ýüz tutup bilersiňiz, soňra synag zerurlyklaryna görä optimizirläp we sazlap bilersiňiz.
Iň amatly konsentrasiýanyň dürli aňlatma ulgamlaryna, maksatly beloklara we synag şertlerine baglylykda üýtgäp biljekdigini bellemelidiris, şonuň üçin her ýagdaýa görä optimizirlemek iň gowusydyr.
Gysgaça aýtsak, DTT beloklarda we beýleki biomolekulalarda disulfid baglanyşyklaryny azaltmak we fermentleriň işjeňligini we durnuklylygyny goramak üçin ulanylyp bilinýän azaldýan serişdedir.Biohimiýa we molekulýar biologiýa synaglarynda giňden ulanyldy.
Iş wagty: 28-2023-nji sentýabr